Tìm bệnh sán chó ở người bằng xét nghiệm ELISA bằng cách lấy máu giúp chẩn đoán chính xác bệnh sán chó tiềm ẩn trong cơ thể mà ít ai ngờ tới. Echinococcus ELISA Test là xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên kết enzyme (ELISA) dùng để tầm soát định tính kháng thể IgG kháng Echonococcus sp. trong mẫu huyết thanh người

Echinococcosis (hydatidosis) là bệnh nhiễm trùng gây ra bởi sán dây thuộc chi Echinococcus. Con người là vật chủ trung gian tiềm tàng và có thể bị nhiễm bởi việc ăn phải trứng sán được thải ra từ phân của động vật bị nhiễm bệnh. Căn bệnh này được gọi là hydatidosis, hoặc bệnh nang sán.

NGUYÊN TẮC XÉT NGHIỆM

Vi giếng được phủ kháng nguyên thô từ nang Echinococcus. Trong bước ủ đầu tiên với huyết thanh bệnh nhân, nếu có bất kỳ kháng thể xuất hiện, chúng sẽ liên kết với các giếng phủ kháng nguyên trong quá trình ủ đầu tiên.

VẬT LIỆU VÀ THÀNH PHẦN

Vật liệu được cung cấp cùng với bộ xét nghiệm

Khay vi giếng: chứa kháng nguyên Echinococccus – 96 giếng trong một khung giữ thanh vi viếng.

Enzyme Liên hợp: Một chai chứa 11ml Protein A liên hợp với peroxidase.

Chứng dương: Một lọ chứa 1 ml huyết thanh thỏ dương tính pha loãng.

Chứng âm: Một lọ chứa 1 ml huyết thanh người âm tính được pha loãng.

Dung dịch Cơ chất TMB: Một chai chứa 11 ml chất tạo màu tetramethylbenzidine (TMB).

Dịch Rửa đậm đặc 20X: Một chai chứa 25ml dung dịch đệm và chất hoạt tính bề mặt đậm đặc.

Đệm Pha loãng: Hai lọ chứa 30 ml dung dịch dung dịch protein đệm.

Dung dịch Dừng phản ứng: Một chai chứa 11 ml dung dịch 0,73 M axit photphoric

QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM

- Bẻ ra số lượng giếng đủ dùng đặt trong khung giữ thanh vi giếng.

- Thêm 100 µl (hoặc hai giọt) chứng âm vào giếng 1, 100 µl chứng dương vào giếng 2 và 100 µl mẫu xét nghiệm đã pha loãng (1:64) vào các giếng còn lại.

Lưu ý: chứng âm và dương được cung cấp đã pha loãng trước đó. Không pha loãng thêm nữa.

- Ủ ở 10 phút trong nhiệt độ phòng 15-25 ºC

- Lắc đều và rửa 3 lần với đệm rửa đã pha loãng.

- Thêm 2 giọt enzyme Liên hợp vào mỗi giếng.

- Ủ 5 phút trong nhiệt độ phòng

- Lắc đều và rửa 3 lần với đệm rửa.

- Loại bỏ nước rửa bằng cách đập giếng lên khăn giấy.

- Thêm 2 giọt chất tạo màu vào mỗi giếng.

- Ủ 5 phút trong nhiệt độ phòng.

- Thêm 2 giọt Dung dịch Dừng phản ứng và trộn bằng cách đảo khung giữ vi giếng.

CÁC SAI SÓT TRONG BƯỚC RỬA CÓ THỂ DẪN ĐẾN KẾT QUẢ DƯƠNG TÍNH GIẢ

Nhìn bằng mắt thường: Nhìn vào mỗi giếng trên nền trắng (ví dụ như khăn giấy) và ghi nhận là không phản ứng, +, ++ hoặc +++.

Máy đọc ELISA: Cho mức Zero với không khí. Đọc bước sóng kép vị trí 450/620-650 nm.

Xử lý sự cố

Chứng âm có màu quá đậm khi xét nghiệm.

Lý do: rửa không đủ

Giải quyết: rửa kỹ hơn. Loại bỏ chất lỏng từ giếng bằng cách đập mạnh lên khăn thấm. Không để vi giếng khô.

Dương tính: > 0.3 đơn vị OD

Âm tính: < 0.3OD.

Kết quả OD âm tính chỉ ra rằng bệnh nhân không có lượng kháng thể đủ phát hiện. Điều này có thể do không bị nhiễm bênh hoặc phản ứng miễn dịch kém của bệnh nhân.

Giải thích Kết quả - đọc bằng mắt

So sánh kết quả với đối chứng, kết quả xét nghiệm dương tính khi tạo màu rõ rệt.

Không thêm chất axit với các mẫu hoặc bất kỳ các chất phản ứng.

BẢO QUẢN

Bảo quản các thành phần đóng chai, các thanh vi giếng và các chất phản ứng ở nhiệt độ 2 - 8ºC.

Bình chứa dung dịch đệm rửa pha loãng có thể được lưu trữ ở nhiệt độ phòng.

KTV. KHƯƠNG VY